| (57) | Abrégé : L'invention concerne une méthode combinant à la fois l'identification du complexe tuberculosis en ciblant les gènes 186110 et MPB64 et la détection des mutations au niveau de la région RRDR du gène rpob de Mycobacterium tuberculosis, responsable de la résistance à la rifampicine dans un échantillon test, utilisant la technique de qPCR suivie d'une analyse de fusion à haute résolution (HRM). La méthode comprend les étapes suivantes: Extraction d'ADN à partir de l'échantillon test, Mélange d'ADN avec un mélange réactionnel comprenant dans une première réaction pour la détection spécifique des séquences du gène 186110 par un couple d'amorces constitué des amorces sens et anti-sens: SEQ ID N°1 et SEQ ID N°2, dans une deuxième réaction pour la détection spécifique des séquences du gène MPB64 par un couple d'amorces constitué des amorces sens et anti-sens: 8EQ ID N°3 et 8EQ ID N°4, et une troisième réaction ciblant la région RRDR du gène rpob par un couple d'amorces constitué: des amorces sens et anti-sens : SEQ ID N7 et SEQ ID N°8 pour un volume final d'au moins 20 ul. Réaction d'amplification selon un cycle thermique et l'établissement des courbes de fusion à haute résolution. Enfin la détection de l'amplification des gèneset l'analyse des courbes de fusion et discrimination des génotypes sauvage et mutants. |
