ROYAUME DU MAROC

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OFFICE MAROCAIN DE LA PROPRIETE INDUSTRIELLE ET COMMERCIALE

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المملكة المغربية

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المكتب المغربي

للملكية الصناعية و التجارية

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(12)FASCICULE DE BREVET
(11)

N° de publication :

MA 37435 A1

(43)

Date de publication :

31.05.2016

(51)

Cl. internationale :

C12Q 1/68; C12N 15/11

(21)

N° Dépôt :

37435

(22)

Date de Dépôt :

17.10.2014

(71)

Demandeur(s) :

MASCIR (MORROCAN FOUNDATION FOR ADVANCED SCIENCE INNOVATION & RESEARCH), RUE MOHAMED EL JAZOULI, MADINAT AL IRFANE RABAT 10100 (MA)

(72)

Inventeur(s) :

AIT BENHASSOU HASSAN ; SEFRIOUI EL HASSANE ; BENTALEB EL MEHDI

(74)

Mandataire :

ABDELHAQ AMMANI

(54)

Titre : TEST MOLÉCULAIRE POUR UNE DÉTECTION RAPIDE ET FIABLE DES MUTATIONS RESPONSABLES DE LA RÉSISTANCE À LA RIFAMPICINE

(57)

Abrégé : L'invention concerne une méthode combinant à la fois l'identification du complexe tuberculosis en ciblant les gènes 186110 et MPB64 et la détection des mutations au niveau de la région RRDR du gène rpob de Mycobacterium tuberculosis, responsable de la résistance à la rifampicine dans un échantillon test, utilisant la technique de qPCR suivie d'une analyse de fusion à haute résolution (HRM). La méthode comprend les étapes suivantes: Extraction d'ADN à partir de l'échantillon test, Mélange d'ADN avec un mélange réactionnel comprenant dans une première réaction pour la détection spécifique des séquences du gène 186110 par un couple d'amorces constitué des amorces sens et anti-sens: SEQ ID N°1 et SEQ ID N°2, dans une deuxième réaction pour la détection spécifique des séquences du gène MPB64 par un couple d'amorces constitué des amorces sens et anti-sens: 8EQ ID N°3 et 8EQ ID N°4, et une troisième réaction ciblant la région RRDR du gène rpob par un couple d'amorces constitué: des amorces sens et anti-sens : SEQ ID N7 et SEQ ID N°8 pour un volume final d'au moins 20 ul. Réaction d'amplification selon un cycle thermique et l'établissement des courbes de fusion à haute résolution. Enfin la détection de l'amplification des gèneset l'analyse des courbes de fusion et discrimination des génotypes sauvage et mutants.